精品免费I91精品一区二区三区久久久久久I精品九九久久I亚洲网站在线看I国产在线vaI亚洲国产视频直播I欧美一级视频在线观看I天天在线免费视频

技術文章您現在的位置:首頁 > 技術文章 > 上海晶抗生物所售單克隆抗體中一般常見篩選方法
上海晶抗生物所售單克隆抗體中一般常見篩選方法
更新時間:2019-08-28   點擊次數:1941次

上海晶抗生物所售單克隆抗體中一般常見篩選方法:

ELISA:酶聯免疫吸附實驗,通常用間接法。

WB:免疫蛋白印跡。
ICC:免疫細胞化學。
IHC:免疫組織化學。

  單克隆抗體由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體,稱為單克隆抗體。通常采用雜交瘤技術來制備,雜交瘤(hybridoma)抗體技術是在細胞融合技術的基礎上,將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。用具備這種特性的單個雜交瘤細胞培養成細胞群,可制備針對一種抗原表位的特異性抗體即單克隆抗體。上海晶抗生物根據單克隆抗體實驗中細胞融合辦法給出具體步驟:歡迎參考!

(一)融合劑
  細胞融合的方法有物理法,如電融合、激光融合,化學融合法和生物融合法,如仙臺病毒,此處例舉化學融合法中的一種即聚乙二醇融合法。

  聚乙二醇(PEG),在分子量為200~700時,呈無色、無臭的粘稠狀液體,分子量大于1 000時,呈乳白色蠟狀固體,能溶于水、乙醇及其他許多有機溶劑,對熱穩定,與許多化學藥品不起作用。用作細胞融合劑的聚乙二醇一般選用分子量為4 000者,常用濃度為50%,pH8.0~pH8.2(用10%NaHCO3調整),分子量小的PEG,融合效應差,又有毒性,分子量過大,則粘性太大,不易操作。50%濃度,pH偏堿時融合效應*。

  也有采用30%~50%濃度的PEG加上10%二甲亞砜。

  不同批號的PEG,即使分子量相同,但融合率卻有明顯差異,選用時必須注意。每批都必須進行細胞毒性試驗后方可應用。要買高純度的,一般選供氣相色譜用的PEG。

(二)融合過程

  融合的方法很多,常用的有轉動法和離心法。

  融合時脾細胞和骨髓瘤細胞的比例為1:1至10:1不等。3:1或5:1*為常用。

1.試劑與材料

(1) 供融合用的脾細胞及骨髓瘤細胞。

(2) 1640培養液100ml。

(3) *1640液100ml。

(4) 2.5%FCS-1640液50ml。

(5) HAT培養液100ml。

(6) 50%PEG:取分子量4 000,高純度的(日本進口或Serva)PEG10g放入25ml瓶中高壓滅菌,使用前用預熱于40℃的1640液10ml等量(W/V)混合,以酚紅檢查pH,一般不必調pH。如pH有改變,可用HCl或NaHCO3調整。

(7) 10ml和50ml的滅菌沉淀管或瓶。

(8) 40孔塑料培養盤。

2.操作方法

⑴ 準備好脾細胞。

⑵ 在50ml沉淀管中混合108脾細胞和107小鼠骨髓瘤細胞,并加入50ml 2.5%FCS-1640液。

⑶ 室溫400g離心3min,使細胞沉淀。

⑷ 移去上清液。

⑸ 輕敲管底部,使沉淀流動,把沉淀管放于40℃水浴中,使其達融合溫度。

⑹ 加預熱至40℃的50%PEG 0.8ml,用1ml吸管緩慢滴加,邊加邊搖沉淀管,肉眼觀察可見有顆粒出現,滴加過程要求持續2min。

⑺ 加1ml1640液,邊加邊搖動,持續1min。

⑻重復⑺一次。

⑼ 加1ml 1640液,邊加邊搖動,持續0.5min。

⑽ 重復⑼一次。

⑾ 加1640液15ml。

⑿ 室溫,400g離心1min,使細胞沉淀。

⒀去上清,輕敲管底部,加25ml含有HAT的*1640液。

⒁ 往已于前一日種有飼養細胞的40孔塑料培養盤中滴加融合的細胞液,每孔1滴(約0.05ml)。

⒂ 輕搖后,放入5%CO2飽和濕度的37℃溫箱中培育。

⒃ 第3、6、9、10日換入含HAT的*1640培養液。注意輕輕吸取上清液,勿將固定于孔底的細胞吸出,根據需要加入適量的飼養細胞。

⒄ 于第12、15日加入含有HAT的*1640培養液。在每次換液前用倒置顯微鏡觀察,大約在10天左右就可觀察到雜交瘤細胞生長出來。大多數雜交瘤細胞在10~20天內出現,但也有在1個月左右才能出現的。雜交瘤細胞出現后,吸取上清液,檢查抗體。

⒅ 對繼續生長的雜交瘤細胞進行增殖傳代。在傳代過程中,依情況取消HAT液和*1640液而代之以10%FCS-1640液。同時保存于液氮和進行克隆化,在這期間每代都要檢查抗體,以防止產生抗體細胞的變異和丟失。

(三)細胞融合的關鍵

1.技術上的誤差常常導致融合的失敗。例如,供者淋巴細胞沒有查到免疫應答。這必然要失敗的。

2.融合試驗*的失敗原因是污染,融合成功的關鍵是提供一個干凈的環境,以及適宜的無菌操作技術。

我司幾千種elisa試劑盒被全國近萬家科研單位和醫療機構應用,發表論文達數萬篇。

公司下設產品研發部、生產部、質檢部、銷售部、發貨部、財務部、后勤部,配備有大型的實驗室,各種生化儀器,ELISA試劑盒我們可以全程免費代測。我們的產品:質量保證、*、供貨及時、服務周到。

上海晶抗生物工程有限公司
  • 網站首頁
  • 關于我們
  • 新聞動態
  • 產品中心
  • 技術文章
  • 榮譽資質
  • 在線留言
  • 聯系我們

上海晶抗生物工程有限公司

地址:上海市金山工業區亭衛公路6558號9幢2441室

版權所有:上海晶抗生物工程有限公司  備案號:滬ICP備16026504號-5  總訪問量:726306  站點地圖  技術支持:智慧城市網  管理登陸

主站蜘蛛池模板: 91chinesexxx| 在线亚洲精品 | 69国产精品视频免费观看 | 国产精品99久久久久人中文网介绍 | 色综合久久久久久久久五月 | 亚洲综合导航 | 色噜噜狠狠狠狠色综合 | 99午夜| 欧美激情综合五月色丁香 | 天堂av高清 | 精品爱爱 | 欧美日韩中文字幕视频 | 欧美亚洲三级 | 久久免费在线观看视频 | 中文字幕免费播放 | 综合天天 | 久久精品三级 | 黄网站污 | 中文字幕在线视频网站 | 在线不卡中文字幕播放 | 久久久久激情 | 久久久国产精华液 | 欧美日韩国产色综合一二三四 | 亚洲成人精品 | 久久久久久蜜av免费网站 | 九九九九色| 在线视频中文字幕一区 | 97色综合 | 日韩,中文字幕 | 亚洲国产精品资源 | 国产毛片久久久 | 亚洲免费国产视频 | 欧美性色19p | 亚洲国产精品99久久久久久久久 | 国产二区视频在线观看 | 丁香六月综合网 | 中文在线字幕免费观 | 天天色天天操天天爽 | 亚洲日韩欧美一区二区在线 | 91国内在线 | 97碰视频| 国产成人av一区二区三区在线观看 | 亚洲精品欧美视频 | 久久国产精品成人免费浪潮 | av中文国产| 欧美精品亚洲二区 | 国产精品久久久久久久久岛 | 蜜臀久久99精品久久久无需会员 | 免费的黄色av | 永久免费av在线播放 | 夜夜躁日日躁狠狠久久88av | 人人干在线 | 国产欧美高清 | 成人毛片久久 | 黄色小说网站在线 | 国产青青青| 国产成人精品免费在线观看 | 91精品久久久久久久久久入口 | 日韩在线视频播放 | 欧美视频99 | 婷婷丁香狠狠爱 | 九九国产精品视频 | 欧美夫妻性生活电影 | 日韩中文字幕第一页 | 97日日碰人人模人人澡分享吧 | 国产91综合一区在线观看 | 久久国产成人午夜av影院宅 | 婷婷99| 久久精品视频在线看 | 欧美日韩一区二区三区在线观看视频 | 丝袜美女在线 | 中文字幕日韩国产 | 色av网站 | 三级黄色大片在线观看 | 国产人成看黄久久久久久久久 | 欧美污网站 | 久久久免费观看视频 | 91av视屏| 中文字幕成人在线 | 天天添夜夜操 | 国产精品12 | 午夜精品久久久久久久久久久 | 色婷婷综合五月 | 中文字幕精品一区久久久久 | 99高清视频有精品视频 | 在线观看免费成人av | 少妇视频一区 | 国产97在线视频 | 国产小视频在线观看免费 | 日韩理论电影在线观看 | 日韩欧美精品在线 | 欧美日韩久久不卡 | 操综合| 一级电影免费在线观看 | 91手机电影 | 不卡电影一区二区三区 | 国产xxxx| 成人av影视 | 91九色综合 |